原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)是指直接(jie)從(cong)機體(ti)取下細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)、組(zu)織(zhi)和(he)部位后立即進行培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)。因(yin)此，較(jiao)為(wei)嚴格地說是指成功傳(chuan)代(dai)(dai)(dai)(dai)之前的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)，此時的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)保持原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)有(you)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)基(ji)(ji)本性質，如果是正常細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，仍(reng)然保留二倍體(ti)數(shu)。原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)在培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)過(guo)程中，也可(ke)能產生基(ji)(ji)因(yin)突(tu)變而形(xing)成無限傳(chuan)代(dai)(dai)(dai)(dai)的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株，傳(chuan)代(dai)(dai)(dai)(dai)次(ci)數(shu)越多，就越有(you)可(ke)能變成細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株（基(ji)(ji)因(yin)缺陷(xian)型），因(yin)此科(ke)學(xue)界也通常把靠前代(dai)(dai)(dai)(dai)至第十(shi)代(dai)(dai)(dai)(dai)以內的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)統稱為(wei)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)。較(jiao)常用的(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)有(you)組(zu)織(zhi)塊培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)和(he)分散細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)。組(zu)織(zhi)塊培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)是將剪(jian)碎的(de)(de)(de)組(zu)織(zhi)塊直接(jie)移植在培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)瓶壁(bi)上，加入(ru)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)后進行培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)。原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)不僅普遍應用于分子(zi)、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)生物學(xue)和(he)生物醫學(xue)基(ji)(ji)礎研究(jiu)。原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)分離試劑(ji)盒廠家直銷

使(shi)用RFect系(xi)列小核(he)酸轉(zhuan)(zhuan)染試(shi)(shi)劑做(zuo)(zuo)siRNA/miRNA轉(zhuan)(zhuan)染測實驗注意(yi)事項：1.細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)接種(zhong)：一(yi)般做(zuo)(zuo)轉(zhuan)(zhuan)染前(qian)(qian)現在(zai)接種(zhong)/鋪板(ban)（細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)計數(shu)大約5*10^4cell/ml），使(shi)做(zuo)(zuo)轉(zhuan)(zhuan)染前(qian)(qian)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)密(mi)度(du)在(zai)30-50%；如果細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)是原代細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，接種(zhong)密(mi)度(du)可(ke)以密(mi)一(yi)些，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)計數(shu)在(zai)2*10^6cell/ml；懸浮細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)可(ke)以在(zai)轉(zhuan)(zhuan)染當天接種(zhong)/鋪板(ban)（細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)計數(shu)大約5*10^4cell/ml），待細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)狀態穩定(ding)后做(zuo)(zuo)轉(zhuan)(zhuan)染前(qian)(qian)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)密(mi)度(du)30-40%。2.為了能在(zai)使(shi)用時有較好的(de)轉(zhuan)(zhuan)染效果，靠前(qian)(qian)次使(shi)用建議您用24孔(kong)板(ban)做(zuo)(zuo)，每孔(kong)2ul轉(zhuan)(zhuan)染試(shi)(shi)劑即(ji)可(ke)。將較佳轉(zhuan)(zhuan)染條(tiao)件（siRNA與轉(zhuan)(zhuan)染試(shi)(shi)劑的(de)用量、比(bi)例）放大到(dao)對應的(de)孔(kong)板(ban)即(ji)可(ke)~唐山正規原代細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)分(fen)離試(shi)(shi)劑盒服務(wu)電話將一(yi)管細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)從液氮(dan)罐中取出，注意(yi)保護手(shou)和眼睛。

選擇原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)原(yuan)(yuan)因(yin)：長(chang)期以來，科學家多依賴(lai)永(yong)生化(hua)的(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)系來進行(xing)各種研(yan)究，但在過去十年，隨著(zhu)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)生物(wu)學的(de)發展，細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)領域(yu)發生了巨大(da)變化(hua)，新型的(de)技術和(he)培養(yang)試劑讓使用(yong)原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)作為研(yan)究對(dui)象(xiang)成為可(ke)能。相(xiang)比于細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)系，原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)更多保(bao)(bao)留了體(ti)(ti)內原(yuan)(yuan)始組織(zhi)的(de)生物(wu)學特(te)征(zheng)，如生長(chang)和(he)衰老，因(yin)此(ci)通過原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)可(ke)建立更好的(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)疾病模型。原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)（Primarycells）是指來源組織(zhi)，經過特(te)定(ding)分離方法制備而成的(de)初始細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。原(yuan)(yuan)代(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)離體(ti)(ti)時間短且不經過永(yong)生化(hua)過程，其生物(wu)學特(te)性未發生很(hen)大(da)變化(hua)，仍保(bao)(bao)持原(yuan)(yuan)有的(de)遺傳特(te)征(zheng)，可(ke)更好地反(fan)映細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)在體(ti)(ti)內的(de)生長(chang)狀態，從而獲得與體(ti)(ti)內生理(li)功能更接近的(de)數據，很(hen)適(shi)合(he)用(yong)于藥物(wu)測試、細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)分化(hua)和(he)轉化(hua)等實驗(yan)研(yan)究。

細(xi)(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)注意事項及常見問(wen)題解答：1、培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)選擇依細(xi)(xi)胞種類(lei)而定(ding)(ding)。如(ru)果是從別的(de)(de)(de)(de)實驗(yan)室借來(lai)的(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞，較初階段一定(ding)(ding)要(yao)保(bao)持細(xi)(xi)胞原(yuan)有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)條(tiao)件；特殊種類(lei)的(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞，比如(ru)內(nei)皮細(xi)(xi)胞，可(ke)以借鑒網上(shang)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)成功的(de)(de)(de)(de)條(tiao)件，添加一些特定(ding)(ding)成分。2、液(ye)體培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)保(bao)存條(tiao)件應是冰箱(xiang)4度冷藏(zang)。小六兒見過有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)大(da)實驗(yan)室細(xi)(xi)胞量(liang)多，一次性購(gou)買(mai)的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)瓶數(shu)也(ye)多，有(you)(you)些人可(ke)能覺得(de)-20冰箱(xiang)保(bao)存時(shi)間會更(geng)久(jiu)一些。但(dan)是經過冷凍后(hou)的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)再溶(rong)化時(shi)，你會發(fa)現培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)顏色發(fa)生(sheng)變(bian)化，顏色變(bian)深(shen)，這就是培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)PH值升高了。3、培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)中都含有(you)(you)大(da)量(liang)的(de)(de)(de)(de)谷氨(an)酰胺(an)，用來(lai)合成細(xi)(xi)胞生(sheng)長所需要(yao)的(de)(de)(de)(de)核酸和(he)蛋白質(zhi)。但(dan)是谷氨(an)酰胺(an)在(zai)溶(rong)液(ye)中不(bu)穩定(ding)(ding)，保(bao)存4周后(hou)的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)需要(yao)重(zhong)新加入谷氨(an)酰胺(an)。所以盡量(liang)不(bu)要(yao)大(da)批量(liang)購(gou)買(mai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，也(ye)不(bu)要(yao)一次配(pei)太多的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)永生(sheng)化細(xi)(xi)胞系通常具有(you)(you)更(geng)快的(de)(de)(de)(de)倍增時(shi)間并(bing)可(ke)持續地分裂。

原(yuan)代(dai)細胞體外(wai)(wai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)現(xian)狀：原(yuan)代(dai)細胞自然生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)有(you)(you)兩(liang)種方式，錨定(ding)(ding)依(yi)(yi)賴(lai)或(huo)非錨定(ding)(ding)依(yi)(yi)賴(lai)，這主要(yao)取決于它們在體內的組(zu)(zu)織(zhi)來源(yuan)：外(wai)(wai)周血(xue)（非錨定(ding)(ding)依(yi)(yi)賴(lai)）或(huo)固體組(zu)(zu)織(zhi)部位（錨定(ding)(ding)依(yi)(yi)賴(lai)）。原(yuan)代(dai)細胞一(yi)旦分離后，24-48h內需(xu)(xu)(xu)要(yao)進行貼壁(bi)或(huo)起始，開始培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)。廣義地說，所(suo)有(you)(you)的哺(bu)乳動物細胞，無論(lun)其類型或(huo)來源(yuan)，都(dou)需(xu)(xu)(xu)要(yao)在與人類生(sheng)(sheng)(sheng)理條(tiao)件（即(ji)(ji)37°C，5%CO2）非常相(xiang)似(si)的條(tiao)件下生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)。此(ci)外(wai)(wai)，它們還需(xu)(xu)(xu)要(yao)一(yi)個(ge)pH可(ke)調節的生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)環境，并且培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)中需(xu)(xu)(xu)包(bao)含(han)(han)細胞類型特(te)定(ding)(ding)的營養(yang)(yang)(yang)因(yin)子、生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)因(yin)子、葡萄(tao)糖和(he)(he)/或(huo)物品(pin)。為了(le)(le)確定(ding)(ding)一(yi)種特(te)定(ding)(ding)細胞類型在低至(zhi)無血(xue)清培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)中正常生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)和(he)(he)功能(neng)所(suo)需(xu)(xu)(xu)的較低條(tiao)件，相(xiang)關(guan)研究工作已經揭示了(le)(le)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)必(bi)須包(bao)含(han)(han)的基(ji)(ji)本成分：胰島(dao)素、轉鐵蛋白(bai)、葡萄(tao)糖和(he)(he)各種鹽(yan)、維生(sheng)(sheng)(sheng)素和(he)(he)氨基(ji)(ji)酸1。然而，除此(ci)之外(wai)(wai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)也(ye)可(ke)以含(han)(han)有(you)(you)組(zu)(zu)織(zhi)和(he)(he)細胞特(te)異(yi)性(xing)細胞因(yin)子和(he)(he)增殖(zhi)、生(sheng)(sheng)(sheng)存(cun)所(suo)需(xu)(xu)(xu)的生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)因(yin)子。例(li)如，原(yuan)代(dai)內皮(pi)細胞和(he)(he)血(xue)管平滑肌細胞都(dou)需(xu)(xu)(xu)要(yao)添加L-谷氨酰胺和(he)(he)成纖維細胞生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)因(yin)子（FGF），但是，應該(gai)添加額外(wai)(wai)的組(zu)(zu)織(zhi)特(te)異(yi)性(xing)因(yin)子，以防(fang)止成纖維細胞的生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)。使(shi)用這種方式需(xu)(xu)(xu)注意勿(wu)使(shi)攪拌速(su)度過快，否則即(ji)(ji)可(ke)使(shi)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液溢出又容易造成污染。貴(gui)陽正規原(yuan)代(dai)細胞分離試(shi)劑盒廠家批發(fa)價

確(que)定一種特定細(xi)(xi)胞類型在(zai)低(di)至(zhi)無血清(qing)培養基中正常生長和功能所需的較低(di)條件。原代細(xi)(xi)胞分離試劑盒(he)廠家直銷(xiao)

原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)培養問(wen)題(ti)：凍(dong)存(cun)的(de)細(xi)胞(bao)該(gai)如何開(kai)(kai)始培養：(1)將一管(guan)細(xi)胞(bao)從液氮罐中取出(chu)，注(zhu)意(yi)保護手和眼睛。(2)將凍(dong)存(cun)管(guan)快(kuai)速(su)的(de)放入37℃水浴(yu)中，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)握(wo)住并旋轉，直(zhi)到管(guan)內物體完全(quan)融化(hua)。(3)將凍(dong)存(cun)管(guan)立即(ji)從水浴(yu)中拿出(chu)，擦(ca)干，轉入無菌環(huan)境。(4)用(yong)70％的(de)酒(jiu)精沖洗凍(dong)存(cun)管(guan)，然后擦(ca)去多(duo)余酒(jiu)精。(5)打開(kai)(kai)蓋子，注(zhu)意(yi)手指不要碰(peng)到里面的(de)螺(luo)紋(wen)（注(zhu)意(yi)，由于(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)有負壓(ya)，開(kai)(kai)蓋時可能會有少量溢出(chu)，這是正常現象）。(6)用(yong)多(duo)聚賴氨酸（或參照說明書）包被培養瓶。多(duo)數細(xi)胞(bao)推薦(jian)的(de)接種密度為每平方厘米5000個細(xi)胞(bao)。原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分離試劑盒廠家直(zhi)銷